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简述反义寡核苷酸技术原理及其调节基因表达的主要机理。
题目
简述反义寡核苷酸技术原理及其调节基因表达的主要机理。
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第1题：
简述蛋白质组表达模式研究的主要技术及其中样品分离技术的原理。
正确答案: 蛋白质组表达模式的主要技术有双向凝胶电泳、以质谱为代表的蛋白质鉴定技术及生物信息学技术。双向凝胶电泳包括等电聚焦电泳（IEF）和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。质谱技术主要有电喷雾质谱（ESI-MS）和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）。
原理：根据蛋白质等电点的不同进行第一向等电聚焦电泳分离；然后转移到二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶上，再根据相对分子量大小不同进行分离。 -
第2题：
简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。
正确答案: M.RNA差异显示技术基于逆转录PCR（RT-PCR）而建立：抽提配对样品如正常和疾病细胞内mRNA（或总RNA），分别逆转录成为cDNA，然后行PCR随机扩增；一条引物为oligo（dA），能与单链cDNA5’端oligo（dT）结合，另一条为随机引物，能与3’端互补核苷酸序列结合，因此经过RT-PCR扩增后，能将mRNA逆转录为cDNA、扩增获得双链cDNA及其不同PCR产物；扩增产物经过凝胶电泳分析，比较组间扩增产物异同，回收差异片段为探针在cDNA文库或基因组文库中筛选相关基因，从而确定这些基因在疾病过程中的参与情况。
优点：简单易行；灵敏度高；重复性好；多能性；快速。
缺点：假阳性率高，达70%以上；逆转录产物仅为mRNA3’非翻译区，需要进一步的文库筛选确定有关基因。 -
第3题：
利用RNAi抑制一个基因的表达是否比利用反义RNA技术更为彻底？
正确答案: RNAi是外源或内源性的双链RNA进入细胞后引起与其同源的mRNA特异性降解.dsRNA进入细胞后，在Dicer作用下，分解为21－22bp的SiRNA.SiRNA结合相关酶，形成RNA介导的沉默复合物RISC.RISC在ATP作用下，将双链SiRNA变成单链SiRNA，进而成为有活性的RISC，又称为slicer.slicer与靶mRNA结合，导致其断裂，进而导致其彻底降解。
反义RNA是与靶mRNA互补的RNA，它通过与靶mRNA特异结合而抑制其翻译表达，反义RNA是与靶mRNA是随机碰撞并通过碱基互补配对，所以，mRNA不一定完全被抑制。 -
第4题：
简述寡核苷酸介导的定点诱变技术的原理。
正确答案:基本原理是：利用Klenow片段（DNA聚合酶I大片段）延伸与单链环状DNA模板相配对的寡核苷酸引物，这个寡核苷酸引物除了有一处与模板的碱基错配外，其余部分均与模板互补，由寡核苷酸的错配处诱发突变，并在体外新合成一个杂合双链DNA，用T4DNA连接酶将新合成的杂合双链DNA连接成双链闭环DNA分子，将体外合成的杂合闭环双链DNA转化到E.coli细胞，由于环状DNA复制的特点，就会同时产生野生型与诱变型两种DNA分子，最后通过筛选，将诱变型DNA分子筛选出来。 -
第5题：
反义寡核苷酸技术（Antisense Nucleic Acid）
正确答案:是指利用人工合成的反义RNA和反义DNA来阻断基因的转录或复制，控制细胞生长在中间阶段，使编码蛋白质的基因能转录为mRNA，因而不能翻译成相应的蛋白质，以达治疗某一疾病的目的、用反义DNA已对某些癌症进行临床试验。 -
第6题：
问答题简述反义寡核苷酸、小干扰RNA、核酶的概念及区别。正确答案： 1.反义寡核苷酸：根据已知的病毒基因组序列设计与其某段序列互补的寡核苷酸称为反义寡核苷酸。
2.小干扰RNA：根据已知病毒的mRNA序列设计短小双链RNA（长度小于26个核苷酸）。导入病毒感染细胞后导致同源病毒基因静止、同源mRNA降解。
3.核酶：核酶是一类具有双重特异性的RNA分子，能识别特异的靶RNA序列，具有酶活性，连续特异性切割降解靶RNA。解析： 暂无解析 -
第7题：
问答题简述基因表达系列分析的原理及其基本过程。正确答案： 基因表达系列分析（serial analysis of gene expression，SAGE）以逆转录产物cDNA上特定区域的9-11bp特异寡核苷酸序列作为标签（tag）来代表各转录物；用连接酶随机串联将多个标签（20-60个）并克隆到载体中，建立SAGE文库；通过对标签的序列分析，获得基因转录的分布以及表达丰度，从而充分了解基因转录组的全貌。SAGE的基础是能特异性代表转录物并含有足够信息的标签。解析： 暂无解析 -
第8题：
问答题何谓反义技术？试述其主要分类及其原理。正确答案： 反义技术（antisense technique）是根据碱基互补原理，用人工或生物合成特异性互补DNA或RNA片段（即反义核酸），使之能特异地与目的核酸片段互补结合，从而抑制甚至阻断目的基因表达的一种技术。根据所用反义核酸的不同，反义技术可分为反义寡核苷酸技术、反义RNA技术和核酶技术等。
反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASON）技术根据碱基互补结合原理，人工或生物合成与目的DNA或RNA互补的寡核苷酸，将其导入细胞，通过其与胞内目的DAN或RNA特异结合，抑制甚至阻断目的基因转录和/或翻译，达到人工调控基因表达的目的。
ASON主要通过一下几种机理调节基因表达：
（1）形成三螺旋DNA（triplex DNA）或D环（D-loop）结构；
（2）与细胞内目的mRNA互补结合，形成DNA-RNA异源杂交体，激活核糖核酸酶H（RNase H）特异性降解mRNA；
（3）与核内不均一RNA（hnRNA）互补结合，破坏正常剪接形成mRNA的过程；
（4）与核糖体rRNA的mRNA结合位点互补结合，阻止mRNA的结合和翻译启动；
（5）ASON与mRNA互补结合，破坏其进入正确翻译部位的途径。
反义RNA（antisense RNA）是一类自身没有编码功能，但能通过配对碱基间氢键与目的RNA特别是mRNA的特定区域补结合，从而抑制基因表达的小分子RNA。在实际操作中，可采用自然存在或人工合成的反义RNA，通过基因重组将其反向插入到表达载体，然后以此重组表达载体转染细胞，在细胞内产生大量翻译RNA。
其作用机理包括：
（1）与引物RNA结合或作用于引物前体，阻止引物与DNA结合，抑制DNA复制；
（2）在转录水平或转录后加工过程中，阻止特定基因转录，或与mRNA5’端结合，阻止加帽过程；或与剪接位点结合，阻止mRNA的剪接形成等；
（3）与SD序列或编码区关键点如AUG结合，阻止mRNA与核糖体结合，阻断翻译等。
核酶是具有生物催化活性的RNA，能按碱基互补原理识别特定核苷酸序列并特异地剪切底物RNA分子。根据其分子大小可分为大分子核酶和小分子核酶两种，前者包括I型内含子（group I intron）、II型内含子（group II intron）和核糖核酸酶P的RNA亚基，均由数百到数千核苷酸组成；小分子核酶按结构分为锤头（hammerhead）型、发夹（hairpin）型等，大小多在35-155个核苷酸之间，应用广泛。根据核酶的结构特点和目的RNA的特异性序列特征，设计并合成针对目的RNA的核酶基因，构建表达载体，导入细胞内，核酶基因表达后通过特异序列识别并降解目的RNA。解析： 暂无解析 -
第9题：
名词解释题反义寡核苷酸技术正确答案： 根据碱基互补结合原理，人工或生物合成与目的DNA或RNA互补的寡核苷酸，将其导入细胞后与胞内目的DNA或RNA特异结合，从而抑制甚至阻断目的基因表达或目的RNA翻译，达到人工调控基因表达的目的。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。正确答案： M.RNA差异显示技术基于逆转录PCR（RT-PCR）而建立：抽提配对样品如正常和疾病细胞内mRNA（或总RNA），分别逆转录成为cDNA，然后行PCR随机扩增；一条引物为oligo（dA），能与单链cDNA5’端oligo（dT）结合，另一条为随机引物，能与3’端互补核苷酸序列结合，因此经过RT-PCR扩增后，能将mRNA逆转录为cDNA、扩增获得双链cDNA及其不同PCR产物；扩增产物经过凝胶电泳分析，比较组间扩增产物异同，回收差异片段为探针在cDNA文库或基因组文库中筛选相关基因，从而确定这些基因在疾病过程中的参与情况。
优点：简单易行；灵敏度高；重复性好；多能性；快速。
缺点：假阳性率高，达70%以上；逆转录产物仅为mRNA3’非翻译区，需要进一步的文库筛选确定有关基因。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述反义寡核苷酸技术原理及其调节基因表达的主要机理。正确答案： 反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASON）技术根据碱基互补结合原理，人工或生物合成与目的DNA或RNA互补的寡核苷酸，将其导入细胞，通过其与胞内目的DAN或RNA特异结合，抑制甚至阻断目的基因转录和/或翻译，达到人工调控基因表达的目的。
A.SON主要通过以下几种机理调节基因表达：
（1）形成三螺旋DNA（triplex DNA）或D环（D-loop）结构；
（2）与细胞内目的mRNA互补结合，形成DNA-RNA异源杂交体，激活核糖核酸酶H（RNase H）特异性降解mRNA；
（3）与核内不均一RNA（hnRNA）互补结合，破坏正常剪接形成mRNA的过程；
（4）与核糖体rRNA的mRNA结合位点互补结合，阻止mRNA的结合和翻译启动；
（5）ASON与mRNA互补结合，破坏其进入正确翻译部位的途径。解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题简述反义基因技术的基本概念、原理及其特点，并举例反义基因技术在食品产业中的应用。正确答案： 概念：转录产生反义RNA的基因称之为反义基因（antisense gene）
原理：把一段DNA序列以反义方向插入到合适的启动子和终止子之间，然后把此基因构建体转化到受体细胞中去（常用农杆菌转化），通过选择培养获得转化生物体的技术。反义基因转录生成的mRNA可抑制同源性内源基因的表达，该法可获得特定基因表达受阻而其它不相关基因的表达不受影响的转基因植株。
特点：
①反义RNA可以高度专一地调节某一特定基因的表达，不影响其它基因的表达。
②转到植物中的反义RNA作用类似遗传缺陷型，表现为显性。避免了二倍体内等位基因的显隐性干扰。
③反义基因整合到植物的基因组中可独立表达和稳定遗传，后代符合孟德尔遗传规律。
④反义基因不必了解其目的基因所编码的蛋白质结构，省去对基因产物的研究工作。
⑤反义基因不改变目的基因结构，应用更加安全
应用：
（1）改造食品微生物------改良微生物菌种；改良乳酸菌遗传特性（抗药基因、风味物质基因、产酶基因、耐氧相关基因、产细菌素基因）；酶制剂的生产；
（2）改善食品原料的品质------改良动物食品性状；改造植物食品原料（提高植物食品氨基酸含量、增加食品的甜味、改造油料作物、改良植物食品蛋白质品质、改善园艺产品采后品质）；
（3）改进食品生产工艺------利用DNA重组技术改进果糖和乙醇生产方法；改良啤酒大麦的加工工艺；改良种子贮藏蛋白的烘烤特性；改善牛乳加工特性；
（4）生产食品添加剂及功能性食品------生产氨基酸；生产黄原胶；超氧化物歧化酶（SOD）的基因工程；生产保健食品有效成分。解析： 暂无解析 -
第13题：
简述基因表达系列分析的原理及其基本过程。
正确答案:基因表达系列分析（serial analysis of gene expression，SAGE）以逆转录产物cDNA上特定区域的9-11bp特异寡核苷酸序列作为标签（tag）来代表各转录物；用连接酶随机串联将多个标签（20-60个）并克隆到载体中，建立SAGE文库；通过对标签的序列分析，获得基因转录的分布以及表达丰度，从而充分了解基因转录组的全貌。SAGE的基础是能特异性代表转录物并含有足够信息的标签。 -
第14题：
反义RNA可增强基因表达，RNA干涉可沉默基因表达。
正确答案:正确 -
第15题：
有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其原理。
正确答案: （1）将特异的反义基因重组到表达载体上（病态载体或质粒），导入靶细胞中转录出反义RNA，形成双链RNA（RNA/RNA双链体），阻碍基因的翻译。
（2）人工合成寡聚脱氧核糖核酸（ODN）经过化学修饰导入细胞，与mRNA和DNA结合，形成RNA/DNA杂链或DNA核苷酸三聚体，影响基因的翻译或转录。
（3）特异性的核酶，根据癌基因设计出特异的“锤头”或“发夹”结构，它能够催化切割，降解异常表达基因的mRNA而影响基因的翻译。 -
第16题：
何谓反义技术？试述其主要分类及其原理。
正确答案: 反义技术（antisense technique）是根据碱基互补原理，用人工或生物合成特异性互补DNA或RNA片段（即反义核酸），使之能特异地与目的核酸片段互补结合，从而抑制甚至阻断目的基因表达的一种技术。根据所用反义核酸的不同，反义技术可分为反义寡核苷酸技术、反义RNA技术和核酶技术等。
反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide，ASON）技术根据碱基互补结合原理，人工或生物合成与目的DNA或RNA互补的寡核苷酸，将其导入细胞，通过其与胞内目的DAN或RNA特异结合，抑制甚至阻断目的基因转录和/或翻译，达到人工调控基因表达的目的。
ASON主要通过一下几种机理调节基因表达：
（1）形成三螺旋DNA（triplex DNA）或D环（D-loop）结构；
（2）与细胞内目的mRNA互补结合，形成DNA-RNA异源杂交体，激活核糖核酸酶H（RNase H）特异性降解mRNA；
（3）与核内不均一RNA（hnRNA）互补结合，破坏正常剪接形成mRNA的过程；
（4）与核糖体rRNA的mRNA结合位点互补结合，阻止mRNA的结合和翻译启动；
（5）ASON与mRNA互补结合，破坏其进入正确翻译部位的途径。
反义RNA（antisense RNA）是一类自身没有编码功能，但能通过配对碱基间氢键与目的RNA特别是mRNA的特定区域补结合，从而抑制基因表达的小分子RNA。在实际操作中，可采用自然存在或人工合成的反义RNA，通过基因重组将其反向插入到表达载体，然后以此重组表达载体转染细胞，在细胞内产生大量翻译RNA。
其作用机理包括：
（1）与引物RNA结合或作用于引物前体，阻止引物与DNA结合，抑制DNA复制；
（2）在转录水平或转录后加工过程中，阻止特定基因转录，或与mRNA5’端结合，阻止加帽过程；或与剪接位点结合，阻止mRNA的剪接形成等；
（3）与SD序列或编码区关键点如AUG结合，阻止mRNA与核糖体结合，阻断翻译等。
核酶是具有生物催化活性的RNA，能按碱基互补原理识别特定核苷酸序列并特异地剪切底物RNA分子。根据其分子大小可分为大分子核酶和小分子核酶两种，前者包括I型内含子（group I intron）、II型内含子（group II intron）和核糖核酸酶P的RNA亚基，均由数百到数千核苷酸组成；小分子核酶按结构分为锤头（hammerhead）型、发夹（hairpin）型等，大小多在35-155个核苷酸之间，应用广泛。根据核酶的结构特点和目的RNA的特异性序列特征，设计并合成针对目的RNA的核酶基因，构建表达载体，导入细胞内，核酶基因表达后通过特异序列识别并降解目的RNA。 -
第17题：
简述反义基因技术的基本概念、原理及其特点，并举例反义基因技术在食品产业中的应用。
正确答案: 概念：转录产生反义RNA的基因称之为反义基因（antisense gene）
原理：把一段DNA序列以反义方向插入到合适的启动子和终止子之间，然后把此基因构建体转化到受体细胞中去（常用农杆菌转化），通过选择培养获得转化生物体的技术。反义基因转录生成的mRNA可抑制同源性内源基因的表达，该法可获得特定基因表达受阻而其它不相关基因的表达不受影响的转基因植株。
特点：
①反义RNA可以高度专一地调节某一特定基因的表达，不影响其它基因的表达。
②转到植物中的反义RNA作用类似遗传缺陷型，表现为显性。避免了二倍体内等位基因的显隐性干扰。
③反义基因整合到植物的基因组中可独立表达和稳定遗传，后代符合孟德尔遗传规律。
④反义基因不必了解其目的基因所编码的蛋白质结构，省去对基因产物的研究工作。
⑤反义基因不改变目的基因结构，应用更加安全
应用：
（1）改造食品微生物------改良微生物菌种；改良乳酸菌遗传特性（抗药基因、风味物质基因、产酶基因、耐氧相关基因、产细菌素基因）；酶制剂的生产；
（2）改善食品原料的品质------改良动物食品性状；改造植物食品原料（提高植物食品氨基酸含量、增加食品的甜味、改造油料作物、改良植物食品蛋白质品质、改善园艺产品采后品质）；
（3）改进食品生产工艺------利用DNA重组技术改进果糖和乙醇生产方法；改良啤酒大麦的加工工艺；改良种子贮藏蛋白的烘烤特性；改善牛乳加工特性；
（4）生产食品添加剂及功能性食品------生产氨基酸；生产黄原胶；超氧化物歧化酶（SOD）的基因工程；生产保健食品有效成分。 -
第18题：
问答题何为反义RNA。它有哪些水平调节基因表达？正确答案： 反义RNA是指能与mRNA互补结合从而阻断mRNA翻译的RNA分子，它是反义基因和或基因的反义链转录的产物，它对基因表达的调节是一种翻译水平的调节。解析： 暂无解析 -
第19题：
单选题关于反义与基因显像，下列说法正确的是（）。A基因显像基于碱基互补原理
B人工合成并用放射性核素标记与目标靶基因互补的小片段反义寡核苷酸
C通过体内核酸杂交，达到封闭或显示靶基因或基因过度表达的组织的目的
D反义与基因显像使肿瘤显像进入了基因水平
E以上都对
正确答案： C解析： 暂无解析 -
第20题：
名词解释题反义寡核苷酸技术（Antisense Nucleic Acid）正确答案： 是指利用人工合成的反义RNA和反义DNA来阻断基因的转录或复制，控制细胞生长在中间阶段，使编码蛋白质的基因能转录为mRNA，因而不能翻译成相应的蛋白质，以达治疗某一疾病的目的、用反义DNA已对某些癌症进行临床试验。解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题简述反义RNA技术及其调节基因表达的主要机理。正确答案： 反义RNA（antisense RNA）是一类自身没有编码功能，但能通过配对碱基间氢键与目的RNA特别是mRNA的特定区域补结合，从而抑制基因表达的小分子RNA。一般将自然存在或人工合成的反义RNA，通过基因重组反向插入到表达载体，以此转染细胞、在细胞内产生大量反义RNA。
其作用机理包括：
（1）与引物RNA结合或作用于引物前体，阻止引物与DNA结合，抑制DNA复制；
（2）在转录水平或转录后加工过程中，阻止特定基因转录，或与mRNA5’端结合，阻止加帽过程；或与剪接位点结合，阻止mRNA的剪接形成等；
（3）与SD序列或编码区关键点如AUG结合，阻止mRNA与核糖体结合，阻断翻译等。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题简述蛋白质组表达模式研究的主要技术及其中样品分离技术的原理。正确答案： 蛋白质组表达模式的主要技术有双向凝胶电泳、以质谱为代表的蛋白质鉴定技术及生物信息学技术。双向凝胶电泳包括等电聚焦电泳（IEF）和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。质谱技术主要有电喷雾质谱（ESI-MS）和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）。
原理：根据蛋白质等电点的不同进行第一向等电聚焦电泳分离；然后转移到二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶上，再根据相对分子量大小不同进行分离。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其原理。正确答案： （1）将特异的反义基因重组到表达载体上（病态载体或质粒），导入靶细胞中转录出反义RNA，形成双链RNA（RNA/RNA双链体），阻碍基因的翻译。
（2）人工合成寡聚脱氧核糖核酸（ODN）经过化学修饰导入细胞，与mRNA和DNA结合，形成RNA/DNA杂链或DNA核苷酸三聚体，影响基因的翻译或转录。
（3）特异性的核酶，根据癌基因设计出特异的“锤头”或“发夹”结构，它能够催化切割，降解异常表达基因的mRNA而影响基因的翻译。解析： 暂无解析