关于定量PCR的描述，不正确的是A．定量PCR在封闭状态下进行，有效避免了产物的实验室污染B．TaqMan探针技术中TaqMan探针的位置位于两条引物之间C．定量PCR可用于病原体的核酸检测D．定量PCR是半定量检测PCR产物的方法

第1题：

第2题：

第3题：

实时定量PCR

正确答案:所谓实时荧光定量 PCR 技术，是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

第4题：

荧光定量PCR的特异性一定高于普通PCR。（）

正确答案:错误

第5题：

什么是定量PCR的Ct值？Ct值是如何确定的？

正确答案: Cycle threshold（Ct）：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数，即在PCR中，荧光信号开始由本底进入指数增长的拐点处所对应的循环数。
Ct值的含义是：PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对应的循环次数。
确定：PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省没置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。实验操作中，Ct值定义为极限上方产生可检测到的统计学上显著的荧光发射所对应的PCR循环次数。“基线上方”也就是阈值高度的量化，定义是基线范围内荧光信号强度标准偏差的10倍。阈值所在的横线与PCR扩增曲线的交点所指的PCR循环次数就是Ct值。Ct值越小，模板DNA的起始拷贝数越多；Ct值越大，反之。正常：18～30。Ct值取决于阈值，阈值取决于基线，基线取决于试验质量。

第6题：

RT-PCR是（）。

• A、包括反转录反应
• B、PCR的模板是mRNA
• C、可以进行基因表达定量分析
• D、PCR的模板是cDNA
• E、不需要DNA聚合酶

正确答案:A,C,D

第7题：

解释原位PCR和定量PCR？

正确答案:1.原位PCR：与原位杂交一样，原位PCR也无需提取DNA/RNA，直接用组织切片和细胞进行PCR或RT-PCR。它既能鉴定含有靶DNA/RNA序列的细胞，又能确定靶DNA/RNA序列在细胞内或染色体上的位置。
2.定量PCR：PCR产物经凝胶电泳分离转移膜上，与放射性核素或化学发光标记的核酸探针杂交。根据放射自显影或化学发光后底板曝光的强弱，用密度计扫描定量。此法在基因诊断中应用甚广。

第8题：

实时荧光定量RT-PCR是（）。

• A、可以实现初始模板拷贝数的定量
• B、SYBR GreenⅠ特异性强
• C、原理利用了临界点循环
• D、利用PCR最终产物量高低进行定量
• E、特异的分子信标探针可以提高定量的准确性

正确答案:A,C,E

第9题：

简述定量PCR的测定原理和方法。

正确答案:荧光标记技术是分子生物学最常用的标记技术，荧光染料或荧光标记物与扩增产物结合后，被激发的荧光强度和扩增产物成正比。而根据扩增原理，扩增是呈指数增长，因此在反应体系和反应条件完全一样下，样本含量应与扩增产物的对数成正比，故在一定的条件下荧光强度和样本含量成正比。

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

普通PCR的灵敏度高于荧光定量PCR。（）

正确答案:错误

第16题：

解释PCR、DNA—PCR、RT—PCR、原位PCR和定量PCR？

正确答案:（1）PCR是聚合酶链反应（Polymerase chain reaction）的英文缩写，是近年来发展起来的一种在体外特异扩增某一目的DNA片段的技术。
（2）DNA—PCR：以DNA为模板，扩增特定核苷酸序列。主要用于检测特定基因或DNA片段的存在，并常与核酸分子杂交结合，分析检定基因突变。
（3）RT—PCR：用提取的mRNA或总RNA（含有mRNA）为模板，通过逆转录扩增cDNA。是检测特定基因表达水平的主要方法之一，也是用于鉴别、诊断RNA病毒的重要技术。
（4）原位PCR：与原位杂交一样，原位PCR也无需提取DNA/RNA，直接用组织切片和细胞进行PCR或RT—PCR。它既能鉴定含有靶DNA/RNA序列的细胞，又能确定靶DNA/RNA序列在细胞内或染色体上的位置。
（5）定量PCR：PCR产物经凝胶电泳分离转移膜上，与放射性核素或化学发光标记的核酸探针杂交。根据放射自显影或化学发光后底板爆光的强弱，用密度计扫描定量。此法在基因诊断中应用甚广。

第17题：

什么叫定量PCR？

正确答案:利用PCR反应来测定样品中的DNA或RNA的原始拷贝数量。利用每个循环都能同步侦测到PCR产物的增生，以获得达到反应饱和前的资料。

第18题：

何谓荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术？

正确答案: 荧光实时定量PCR（real-timequantitativePCR，RQ-PCR）技术即在PCR反应体系中加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号的变化真实的反映了体系中模板的增加，通过检测荧光信号，从而实时监测整个PCR反应过程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

第19题：

荧光定量PCR可以做绝对定量分析。（）

正确答案:正确

第20题：

半定量反转录PCR

正确答案:是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法，通过mRNA反转录成cDNA，再进行PCR扩增，并测定PCR产物的数量，可以推测样品中特异mRNA的相对数量。以半定量RT-PCR为基础建立起来的mRNA含量测定技术，较含内标化的RT-PCR定量测定的mRNA的方法更为简便可行。

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：