纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的溶剂是流动相;层析溶剂由有机溶剂和水组成。在层析时,将样品点在距滤纸一端约2~3 cm处的某一处,称原点;然后在密闭容器中沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配,使它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置用比移(rate of flow,Rf)来表示,所谓比移,指在纸层析中,从原点至氨基酸停留点(又称为层析点)的距离(X)与原点至溶剂前沿的距离(Y)的比值,在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。