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基因工程中常用的工具酶有哪些?它们在基因工程中的用途如何?
题目
基因工程中常用的工具酶有哪些?它们在基因工程中的用途如何?
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第1题：
基因工程所用的工具酶有（）；（）、连接酶、修饰酶四大酶类。
正确答案:核酸酶、聚合酶 -
第2题：
基因工程的工具酶主要有（）和（）。
正确答案:限制性核酸内切酶；DNA连接酶 -
第3题：
分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有哪些？它们的原理是什么？
正确答案: 分离纯化基因工程药物常用的色谱方法有：离子交换色谱，疏水色谱，亲和色谱和凝胶过滤色谱；
离子交换色谱，以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子和交换剂上的平衡离子进行可拟交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种色谱方法；
疏水色谱，利用蛋白质表面的疏水区域与固定相上疏水性基团相互作用力的差异对蛋白质组分进行分离的色谱方法；
亲和色谱：利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除的原理分离纯化蛋白质；
凝胶过滤色谱，是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相色谱方法。 -
第4题：
常见的基因工程抗体有哪些？如何制备？
正确答案:常见的基因工程抗体有：
⒈人—鼠嵌合抗体：由于抗体同抗原结合的功能决定于抗体分子的可变区，同种性免疫原性决定于抗体分子的稳定区，如果在基因水平上把鼠源性单克隆抗体的重链和轻链可变区分离出来，分别与人的Ig的重链和轻链的稳定区基因连接成人—鼠嵌合抗体的重链和轻链基因，再共转染骨髓瘤细胞，就能表达出完整的人—鼠嵌合抗体。
⒉改形抗体：Ig分子中参与构成抗原结合部位的区域是重链和轻链可变区中的互补决定区，而不是整个可变区。重链和轻链各有三个互补决定区，其他部分称为框架区。如果用鼠源性单克隆抗体的互补决定区序列替换人的Ig分子中的互补可变区序列，则可使人的Ig分子具有鼠源性单克隆抗体的抗原结合的特异性。抗体分子中鼠源部分只占很小的比例，可基本消除免疫原性。
⒊双特异单链抗体（bisFvs）：将噬菌体展示技术应用于scFv筛选，可直接从杂交瘤和外周血淋巴细胞中提取mRNA，构建单链抗体库，从而更易获得高特异性、高亲和力scFv，将两条不同来源的scFv组合成具有两种不同抗原结合特征的新型抗体。
⒋单链抗体：由一段弹性连接肽把抗体可变区重链与轻链相连而成，具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能单位。
⒌单域抗体：抗体的可变区重链和轻链是具有结合抗原特异性的小抗体片断。 -
第5题：
基因工程是在DNA分子水平上对生物的定向改造。下列有关基因工程的叙述中，错误的是（）
- A、DNA限制性内切酶可用于目的基因的提取
- B、运载体和目的基因必须要用同一酶处理
- C、基因工程所用的工具酶是限制酶、运载体、DNA连接酶
- D、带有目的基因的运载体是否进入受体细胞需要检测
正确答案:C -
第6题：
载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？
正确答案: 基因工程中常用的载体（vector）主要包括质粒（plasmiD.、噬菌体（phagE.和病毒（virus）三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。 -
第7题：
什么是基因工程？基因工程和DNA重组的关系如何？基因工程有何理论和实践意义？
正确答案:要点：①获取外源目的基因；②选择基因载体（通常为质粒、噬菌体等），使目的基因与载体连接，形成重组DNA；③通过转化（或转染）将重组DNA引入受体细胞；④从大量的受体细胞中筛选出带有重组体的细胞进行克隆。
意义：①利用基因工程技术，可以大量生产在一些正常细胞中产量很低的多肽物质，用于医药等工业生产中；②定向改造生物基因结构，以生产抗病强、品质优的各种农副产品，提高其经济价值；③用于生命科学的基础研究。
值得注意的是基因工程技术若使用不当、管理不善，也会给人类带来灾难。 -
第8题：
酶在基因工程和细胞工程方面有哪些重要用途？
正确答案:除去细胞壁；大分子切割；大分子连接。 -
第9题：
问答题试述微生物在基因工程技术各环节中的用途。正确答案： 某些微生物细胞特定功能的染色体DNA可作为基因供体。微生物细胞中的质粒或某些噬菌体、病毒可作为基因工程载体。作为基因工程受体菌（如大肠杆菌、酿酒酵母）。基因工程中的工具酶绝大多数来自微生物。基因工程构建的“工程菌”通过微生物工程发挥经济效益。解析： 暂无解析 -
第10题：
问答题什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？正确答案： K.lenow酶是1974年 Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解 DNA聚合酶 I，得到两个片段，其中大片段的分子量为 75kDa，它具有 5’→ 3’聚合酶和 3’→ 5’外切核酸酶的活性，小片段具有 5’→ 3’外切核酸酶活性。由于大片段失去了 DNA聚合酶 I中会降解 5’引物的 5’→ 3’外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。 Klenow酶主要有下列用途：
（1）修复反应，制备平末端可用 Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其分方法产生的 5’或 3’突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的 DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3’末端标记的探针。用 Klenow 酶修复 5’突出末端的反应主要是利用了 Klenow 酶的 DNA聚合酶活性，是填补反应；而修复 3’突出末端则是用 Klenow酶的 3’→ 5’外切核酸酶的活性，是切割反应。用 Klenow酶的切割反应来修复 3’突出末端是不理想的，改用 T4DNA 聚合酶或其他的酶是更好的选择。
（2）标记 DNA3’突出末端（protmding end）该反应分两步进行：先用 3’→ 5’的外切核酸酶活性除去 3’突出末端，产生 3’隐含末端，然后在高浓度的标记底物（α～32p_dNTP）存在下，使降解（3’→ 5’）作用与聚合（5’→ 3’）作用达到平衡。这种反应也叫交换或取代反应（exchange／replacem—entreaction）。不过这一反应用 T4DNA 聚合酶的效果更好，因它的 3’→ 5’外切核酸酶活性较强。
（3）其他的一些用途：包括用双脱氧末端终止法进行 DNA序列分析、用于 cDNA第二链的合成、在定点突变中用于合成第二链、用引物延伸法（primer extension）制备单链 DNA探针等。解析： 暂无解析 -
第11题：
问答题简述基因工程中常用的几种工具酶。正确答案： （1）限制性核酸内切酶：主要用途是识别DNA特定序列，切断识别点或其周围的DNA链，分为Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类酶。其中Ⅰ类限制性核酸内切酶由3中不同亚基构成，兼具有修饰酶活性和依赖于ATP的限制性内切酶活性，它能识别和结合于特定的DNA序列位点，去随机切断在识别位点以外的DNA序列；Ⅱ类酶切割DNA特异性最强，Ⅲ类酶与Ⅰ类酶相似，是多亚基蛋白，既有内切酶活性又有修饰酶活性
（2）DNA连接酶：催化DNA中相邻的5‘磷酸基与3’羟基间形成磷酸二酯键，是DNA片段之间的切口封和，主要是将不同的DNA片段连接起来
（3）DNA聚合酶：催化DNA体外合成反应，大多数需DNA模板，合成产物的序列与模板互补
（4）磷酸酶：去除DNA的5‘磷酸基团的催化特性，可被用于抑制质粒DNA的自身连接和环解析： 暂无解析 -
第12题：
问答题已商品化的以微生物为表达系统的基因工程药物主要有哪些？它们有何生理功能及临床用途？正确答案： 已商品化的以微生物为表达系统的基因工程药物主要有：人胰岛素、人生长激素、干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、红细胞生成素、肿瘤坏死因子、组织型纤溶酶原激活剂、人心钠素、乙型肝炎疫苗等。解析： 暂无解析 -
第13题：
试述微生物在基因工程技术各环节中的用途。
正确答案: 某些微生物细胞特定功能的染色体DNA可作为基因供体。微生物细胞中的质粒或某些噬菌体、病毒可作为基因工程载体。作为基因工程受体菌（如大肠杆菌、酿酒酵母）。基因工程中的工具酶绝大多数来自微生物。基因工程构建的“工程菌”通过微生物工程发挥经济效益。 -
第14题：
基因工程中使用的连接酶有（）和（），其中以（）更常用。
正确答案:T4DNA连接酶；大肠杆菌连接酶；T4DNA连接酶 -
第15题：
基因工程常用的工具酶有哪些？
正确答案:限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA多聚酶、DNA末端转移酶、逆转录酶 -
第16题：
下列是基因工程中常用的工具酶的是（）.
- A、限制性内切酶
- B、DNA连接酶
- C、DNA聚合酶
- D、果胶酶
正确答案:A,B,C -
第17题：
基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？
正确答案: 1）大肠杆菌DNA聚合酶
2）Klenowfragment
3）T7DNA聚合酶
4）T4DNA聚合酶
5）修饰过的T7DNA聚合酶
6）逆转录酶
7）TaqDNA聚合酶 -
第18题：
已商品化的以微生物为表达系统的基因工程药物主要有哪些？它们有何生理功能及临床用途？
正确答案: 已商品化的以微生物为表达系统的基因工程药物主要有：人胰岛素、人生长激素、干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、红细胞生成素、肿瘤坏死因子、组织型纤溶酶原激活剂、人心钠素、乙型肝炎疫苗等。 -
第19题：
简述基因工程中常用的几种工具酶。
正确答案: （1）限制性核酸内切酶：主要用途是识别DNA特定序列，切断识别点或其周围的DNA链，分为Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类酶。其中Ⅰ类限制性核酸内切酶由3中不同亚基构成，兼具有修饰酶活性和依赖于ATP的限制性内切酶活性，它能识别和结合于特定的DNA序列位点，去随机切断在识别位点以外的DNA序列；Ⅱ类酶切割DNA特异性最强，Ⅲ类酶与Ⅰ类酶相似，是多亚基蛋白，既有内切酶活性又有修饰酶活性
（2）DNA连接酶：催化DNA中相邻的5‘磷酸基与3’羟基间形成磷酸二酯键，是DNA片段之间的切口封和，主要是将不同的DNA片段连接起来
（3）DNA聚合酶：催化DNA体外合成反应，大多数需DNA模板，合成产物的序列与模板互补
（4）磷酸酶：去除DNA的5‘磷酸基团的催化特性，可被用于抑制质粒DNA的自身连接和环 -
第20题：
填空题基因工程的操作过程中要用到的重要工具有（）、连接酶和（）。正确答案： 内切酶,运载工具质粒解析： 暂无解析 -
第21题：
问答题酶在基因工程和细胞工程方面有哪些重要用途？正确答案： 除去细胞壁；大分子切割；大分子连接。解析： 暂无解析 -
第22题：
问答题细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同？在基因工程中有什么用途？正确答案： 主要差别是：CIP68℃时失活，而 BAP68℃稳定，且耐酚抽提。
应用： （1）dsDNA 的 5，端脱磷酸，防止 DNA 的自身连接。但是用 CIP 处理后，最好将 CIP 除去后，再进行连接反应。
（2）DNA 和 RNA脱磷酸，然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。解析： 暂无解析 -
第23题：
问答题基因工程常用的工具酶有哪些？正确答案： 限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA多聚酶、DNA末端转移酶、逆转录酶解析： 暂无解析