PCR反应的特点不包括（)A．时间短,只需要数小时B．扩增产物量大C．只需要微量的模板D．底物必须标记

第1题：

第2题：

第3题：

以下关于PCR的说法错误的是（）

• A、PCR反应必须要有模板、引物、dNTP和DNA聚合酶
• B、应用PCR技术可以进行定点突变
• C、PCR的引物必须完全和模板互补配对
• D、PCR反应中，仅介于两引物间的DNA片段得到大量扩增

正确答案:C

第4题：

影响PCR反应的因素有哪些？

正确答案:PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。

第5题：

PCR的特点不包括（）。

• A、只需微量模板
• B、只需数小时
• C、扩增产物量大
• D、底物必须标记
• E、变性、复性、延伸三个步骤循环进行

正确答案:D

第6题：

什么是PCR，有什么特点，扩增反应有哪几个步骤？

正确答案: PCR即聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)，具有特异、敏感、快速等特点。扩增反应包括3个步骤，变性、退火（复性）、延伸3个步骤。

第7题：

简述PCR反应体系，实验中注意的问题。

正确答案:1.PCR原理：PCR是利用DNA合成的原理，合成两个与靶DNA两侧序列互补的引物，在体外进行靶DNA的重复合成。
包括3个步骤：
（1）DNA变性：加热使靶DNA双链解离成两条单链。
（2）引物与靶DNA退火：降低温度至适当水平，促使两个引物根据碱基互补的原理分别结合至靶DNA的两条链的3’末端。
（3）引物延伸：在DNA聚合酶催化下，引物沿着靶DNA3’末端向5’末端延伸（引物延伸是5’→3’方向）。新合成DNA在新一轮变性解离后形成更多的模版与引物退火，在DNA聚合酶催化行，合成新一轮的靶DNA。每一轮DNA的合成均以所有DNA为模版，靶DNA数量呈指数增加。
2.注意问题：引物
（1）引物长度：15~30bp，常用为20bp
（2）引物扩增跨度：以200~500bp为宜，特点条件下课扩增至10kb
（3）引物碱基：G+C含量以40~60%为宜，太少扩增效果不佳，太多易出血非特异性条带；ATGC最后随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸成串排列
（4）避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性扩增条带
（5）引物3’末端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对
（6）引物中有货最好加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点
（7）引物特异性：引物与核苷酸序列数据库的其他序列无明显同源性
（8）引物量： 每条引物浓度0.1~1μmol或10~100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，过高引起错配和非特异性扩增，增加引物之间形成聚体的机会
P.CR循环次数：循环次数觉得PCR扩增程度。主要取决于模版DNA的浓度。一般的循环次数在30~40次，次数越多，非特异性产物量亦随之增多
设立对照：PCR反应应设立阳性和阴性对照，是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合理的一个重要参考指标。

第8题：

关于重组PCR定点突变和大引物突变法的叙述正确的是（）

• A、只能在DNA片段的特定部位产生突变
• B、不需要测序确定突变结果
• C、重组PCR定点突变法需要4种扩增，3轮PCR反应
• D、大引物法需要3种扩增引物，3轮PCR反应
• E、重组PCR定点突变法操作较大引物法简单

正确答案:C

第9题：

第10题：

第11题：

第12题：

第13题：

第14题：

第15题：

在固定容积的PCR反应体系中，加入越多的模版，PCR反应的效果就会越好。（）

正确答案:错误

第16题：

下列各项中，影响PCR反应特异性的因素不包括（）

• A、Mg²⁺浓度
• B、模板纯度
• C、引物长度
• D、退火温度
• E、变性时间

正确答案:E

第17题：

简述PCR原理及其基本反应步骤。

正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。

第18题：

什么是PCR，请试述PCR技术的原理，以及PCR的反应过程？

正确答案:P.CR就是聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction）。
原理：双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
反应过程：首先。双链DNA分子在临近沸点的温度下加热分离成两条单链DNA分子；然后，加入到反映混合物中的引物和模板DNA的特定末端相结合；戒指，DNA聚合酶以单链DNA为模板，利用反应混合物中的三种核苷三磷酸，在引物的3’-OH端合成新生的DNA互补链。

第19题：

填充床反应器PCR

正确答案:是将固定化酶堆叠在反应容器中进行催化反应的一种反应器，适用于固定化酶进行催化反应。

第20题：

PCR反应的温度循环周期不包括（）

• A、DNA变性
• B、DNA表达
• C、引物退火
• D、反应延伸

正确答案:B

第21题：

第22题：

第23题：

第24题：