第2题:
核酸分子探针有哪些种类? 试说明各类探针的特点
(1)基因组DNA探针:克隆化的各种基因片段是最常用的核酸探针,因真核基因组存在高度重复序列,探针应尽可能选用基因的编码序列(外显子),避免使用内含子及其它非编码序列,否则探针可能因高度重复序列的存在引起非特异性杂交而导致假阳性结果。
(2)cDNA探针:与mRNA互补的DNA链称cDNA,cDNA中不存在内含子及其它高度重复序列,故特异性高,是一种较理想的核酸探针。
(3)RNA探针:RNA探针有以下优点:
①RNA:RNA、RNA:DNA杂交体较DNA:DNA杂交体的稳定性高,杂交反应可在更严格的条件下进行,特异性高
②RNA单链不存在双链DNA探针的互补双链的复性,杂交效率高
③RNA无高度重复序列,非特异杂交少
④杂交后可用RNase消化未杂交的RNA探针,可降低杂交本底
(4)寡核苷酸探针:人工合成的寡核苷酸片段作探针优点:
①可以根据需要合成相应的序列,避免基因组DNA探针中高度重复序列所带来的影响
②多数长为15-30bp,即使有一个碱基不配对也会影响杂交链的Tm值,严格控制反应条件,可检测出基因点突变
③探针复杂性降低,杂交反应时间较短。